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022-66387942一、流式抗体核心选择原则(快准狠?。?/span>
1. 按样本物种选克隆号
物种 | 推荐抗体来源 | 明星克隆号举例 |
人 | 小鼠抗人 | CD3-UCHT1 |
小鼠 | 大鼠抗小鼠 | CD4-GK1.5 |
大鼠 | 小鼠抗大鼠 | CD45-OX1 |
> ? 避坑:勿用人源化抗体做小鼠实验(交叉反应假阳性)
2. 按靶标表达量选荧光染料
3. 按激光器选染料组合
仪器配置 | 推荐方案 |
单激光(488nm) | FITC + PE + PerCP |
双激光 | FITC + PE-Cy7 + APC |
四激光 | BV421 + PE + APC + Spark NIR780 |
二、流式抗体3步速选流程图(收藏!)
三、流式抗体高频问题解决方案
1. 信号弱/无信号
- 对策:
1. 检查抗体有效期(≤1年)
2. 增加抗体浓度(常规1:100 → 1:50)
3. 改用高亮度染料(如FITC→PE)
2. 背景噪音高
- 对策:
1. 加Fc阻断剂(BioLegend 422301)
2. 优化破膜时间(胞内染≤30min)
3. 设置FMO对照
3. 多色串扰严重
- 对策:
冲突组合 | 替代方案 |
FITC vs PE | 改用PerCP |
APC vs PE-Cy7 | 改用APC-Cy7 |
四、万能多色方案模板
4色基础版(适合凋亡/周期分析)
通道 | 靶标 |
FITC | Annexin V |
PE | CD4 |
PerCP | CD8 |
APC | PI/7-AAD |
8色免疫分型版(适合T/B/NK分析)
通道 | 靶标 |
BV421 | CD3 |
PE | CD4 |
APC | CD8 |
PE-Cy7 | CD19 |
APC-Cy7 | CD56 |
Spark NIR685 | CD16 |
FITC | CD45 |
PerCP | HLA-DR |
五、流式抗体品牌选购建议
需求 | 推荐品牌 | 明星产品线 |
高性价比 | BioLegend | PureBlk™ 阻断剂 |
超高灵敏度 | BD Biosciences | Horizon™ 染料 |
稀有靶标 | Thermo Fisher | eBioscience™ |
BioLegend、BD Biosciences、Thermo Fisher代理——天津益元利康生物科技有限公司,提供各种蛋白、细胞、菌株、抗体、试剂盒、耗材等,欢迎咨询选购。
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