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超滤离心管使用方法

更新时间:2025-08-12点击次数:64

超滤离心管操作指南:3大误区毁样本|附分子截留/离心参数对照表

超滤回收率<50%?本文详解Millipore/Amicon超滤管选型技巧、离心程序、防堵膜策略,提供蛋白浓缩/缓冲液置换/脱盐全方案!附转速-分子量计算公式+堵膜急救方案。

一、超滤管选型黄金法则(立即避坑)

需求

膜材质

截留分子量

代表产品

蛋白浓缩

再生纤维素

10kDa

Amicon® Ultra-4

病毒纯化

PES

100kDa

Millipore UFC9100

核酸回收

低吸附PVDF

30kDa

Vivaspin® 20

内毒素去除

超低吸附

3kDa

Amicon® Ultra-15

>??选错致命伤:截留分子量>目标物样本穿透丢失!

二、操作流程(4步提升回收率至>90%

Step1预处理(防膜失效关键!)

1.离心管冰上预冷

2.注入1ml预冷PBS

3.1500g×5min(活化膜孔,去除甘油/乙醇)

Step2样本加载

参数

标准值

避坑要点

最大装载量

80%管容积

防溢出污染

样本粘度

50cP(过高需稀释)

粘度检测方法:移液器吸打阻力

保留液体积

≥50μl(防干膜)

定时观察液面

Step3离心程序(转速/时间公式)

?离心力计算公式:

RCF(g)=0.00001118×r×(RPM)2

r=离心半径cm

分子量-离心参数表:

截留分子量

推荐离心力

时长

3kDa

4000g

20-30min

10kDa

3500g

15-25min

50kDa

3000g

10-15min

>??防过热技巧:4℃离心+10min暂停降温

Step4样本回收

-正置法:直接吸取浓缩液(回收率80-90%

-倒置法(高价值样本):

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三、3大高频问题急救方案

问题1:膜堵塞(流速骤降)

-处理步骤:

1.0.1MNaOH反向冲洗10min

2.超纯水冲洗3

3.500g×5min低速离心疏通

 问题2:回收率低

-根因排查:

现象

原因

对策

滤液浑浊

膜破裂

更换新管(勿超速)

管壁挂液明显

疏水吸附

预处理加 0.01% Tween-20

 

问题3:浓缩倍数不足

-科学浓缩比计算:

```

浓缩倍数=初始体积/终体积

(推荐≤10倍,防蛋白沉淀)

```

-高倍浓缩技巧:分次添加样本(维持液面高度)

四、不同应用场景参数优化


实验目标

关键参数调整

回收率

蛋白浓缩

4℃ + 3500g × 15min

92%

缓冲液置换

预装新缓冲液 ×3

99%

脱盐

超纯水稀释 ×5

98%

外泌体纯化

100kDa + 3000g ×30min

80%




五、产品推荐

密理博millipore超滤离心管——天津益元利康生物科技有限公司,欢迎咨询。

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