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液体培养基的常见问题有哪些？

2023-10-26 液体培养基是最为常见的培养基类型，它具有可进行通气培养或振荡培养的优势，因为它的流动性便于精确控制培养基的溶液温度、营养浓度和气体含量等；它对细胞生长时的附着能力要求小，细胞可快速扩增；当需要大量细胞培养时也更经济高效。那么你知道液体培养基的常见问题有哪些吗？让我们一起来看看吧！一、液体培养基为什么颜色不一样酚红加量不同，导致颜色差异：DMEM＞MEM＞DMEM/F12＞RPMI1640＞F12&F10。二、培养基放冰箱里颜色变深空气中CO2浓度低，培养基内CO2会逐渐溢出，...

你知道什么是琼脂糖凝胶电泳吗？

2023-10-25 你知道什么是你知道什么是琼脂糖凝胶电泳吗？让我们一起来看看吧！一、琼脂糖凝胶的特点核酸分子是两性解离分子，在高于其等电点的电泳缓冲液中，其碱基不解离，而磷酸基团全部解离，核酸分子因而带负电荷，电泳时向正极迁移。琼脂糖主要从海洋植物琼脂中提取而来并经糖基化修饰，为一种聚合链线性分子，使用琼脂糖凝胶作为电泳支持介质，发挥分子筛功能，使得大小和构象不同的核酸分子的迁移率出现较大差异，从而达到分离的目的。因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下。（1）琼脂糖凝胶电泳操...

琼脂糖凝胶电泳实验的试验方法是什么？注意事项有什么？

2023-10-25 你知道琼脂糖凝胶电泳实验的实验方法是什么吗？有什么注意事项呢？让我们一起来看看吧！一、琼脂糖凝胶电泳实验方法1.择适合样品预期片段大小的琼脂糖凝胶浓度百分比。将琼脂糖粉末与用于运行凝胶的相同类型的缓冲液（TAE）结合起来，加热使混合物融化，避免沸腾。2.选择所需尺寸的凝胶浇注模具和梳子，为样品和marker提供足够数量的孔，以及容纳每个待装样品数量的孔容量。3.胶凝固后，将凝胶放入电泳仪中，电泳液没过凝胶，根据加入量的多少，决定混合多少ul的lodingbuffer，将样液混...

如何选择DNA提取方法

2023-10-25 DNA的提取可以简单的分为裂解和纯化两大步骤，裂解是破坏样品细胞结构，从而使样品中的DNA游离在裂解体系中的过程，纯化则是使DNA与裂解体系中的其它成分，如蛋白质、盐及其它杂质分离的过程。那么该如何选择DNA提取方法呢？让我们一起来看看吧！一、酚氯仿抽提法酚氯仿抽提是去除蛋白质的有效手段，但如果蛋白质含量超过了其饱和度，裂解体系中的蛋白质就不会被一次性去除，需要进行多次反复抽提，而每次的抽提均会导致核酸的损失。酚氯仿抽提的优势是成本低廉，对实验条件要求较低。二、高盐沉淀法高盐...

荧光原位杂交（FISH）的实验步骤是什么？

2023-10-24 荧光原位杂交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。那么你知道荧光原位杂交（FISH）的实验步骤是什么吗？让我们一起来看看吧！一、实验材料准备1.实验用具及材料（1）人的MyoD1（MYF3)基因探、人外周血中期染色体细胞标本；（2）指甲油、甲酰胺、氯化钠、柠檬酸钠、氢氧化钠、吐温20等；（3）恒温水浴锅、培养箱、染色缸...

蛋白表达的常见问题有哪些？

2023-10-24 蛋白表达实验的时，有时候实验会觉得参考实验方法和克隆的蛋白基因序列wan全没有问题，但蛋白电泳就是没有结果。下面让我们一起来看看蛋白表达的常见问题有哪些吧！1、载体构建错误，很多克隆新人经常弄错读码框。比如Qiagen的pQE系列载体，其克隆位点常有一两个碱基的区别；另外有些酶产生粘端有些酶产生平端，这些都容易导致读码框错误，从而表达不出来。2、宿主菌选择不当，不同的宿主菌其基因型是不一样的。有些经过特殊修饰的载体，或者特殊用途的载体，或者有特殊启动子的载体，必须选择合适的宿...

PCR反应体系主要是什么？

2023-10-23 你知道PCR反应体系主要包含那些吗？让我们一起来看看吧！一、模板（template)模板即扩增用的DNA，可以是任何来源DNA(如基因组DNA、质粒DNA等)或RNA（如总RNA、mRNA、tRNA、rRNA、病毒RNA等），但必须符合两个条件：一是纯度必须较高，二是浓度不能太高以免抑制。模板是待扩增的目的基因或特异片段，如诊断病人是否携带有突变基因时，其模板就是提取的病人血液中的DNA或RNA片段。PCR对模板DNA的纯度不要求很高，但应尽量不含有对PCR反应有抑制作用的杂...

PCR技术的基本原理、各步骤的目的是什么？

2023-10-23 你知道PCR技术的基本原理、各步骤的目的是什么吗？让我们一起来看看吧！一、PCR技术基本原理PCR是一种选择性体外快速扩增DNA片段的方法。在体外以类似于细胞内DNA的半保留复制过程，以拟扩增的模板DNA分子，与模板DNA互补的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4种dNTP及适合的缓冲体系组成的反应体系，经过重复地变性一退火一延伸三步，扩增新的目的DNA链，这个过程通过控制反应体系的温度来实现。PCR包含下列三步反应：1、变性(denaturation)将反应体系混合物经加热至94...