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PCR反应污染的处理方法有哪些？

2023-10-13 PCR反应的特点是具有较大扩增能力与灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。那么你知道PCR反应污染的处理方法有哪些吗？让我们一起来看看吧！一、环境污染1.稀酸处理法：对可疑器具用1mol/L盐酸擦拭或浸泡，使残余DNA脱嘌呤。2.紫外照射（UV）法：紫外波长（nm）一般选择254/300nm,照射30min即可。需要注意的是，选择UV作为消除残留PCR产物污染时，要考虑PCR产物的长度与产物序列中碱基的分布，UV照射仅对500bp以上长片段有效...

离心柱法提取DNA的实验步骤与注意事项有哪些？

2023-10-12 离心柱上有硅胶滤膜，在高盐低pH条件下，核酸能结合到硅胶膜上，而蛋白质和其他代谢产物被洗脱；后续改变反应条件到低盐高pH来洗脱纯化DNA。用离心柱法来提取DNA，得到的DNA质量好，纯度和浓度较高。那么离心柱法提取DNA的实验步骤与注意事项有哪些呢？让我们一起来看看吧！一、实验步骤1.平衡液预处理取一个新的吸附柱放在收集管中，悬空加入100μL的平衡液至离心柱中，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将离心柱放回收集管中，备用。2.处理材料（1）如提取材料为血液，...

如何制备蛋白质电泳凝胶？

2023-10-12 你知道该如何制备蛋白质电泳凝胶吗？让我们一起来看看吧！一、制备方法1.根据垂直电泳槽说明书安装玻璃板，确定需配制分离胶的浓度和体积，配制所需分离胶；2.迅速将分离胶注入两玻璃板间隙中，留出灌注积层胶所需空间（梳子的齿长再加1cm，用滴管小心地在分离胶上覆盖一层0.1%SDS（当丙烯酰胺浓度≤8%时）或异丁醇或水（当丙烯酰胺浓度≥10%时），覆盖层可防止氧扩散进入凝胶而抑制聚合反应。将凝胶垂直置于室温下；3.分离胶聚合wan全后，倒出覆盖层液体，用去离子水洗涤凝胶顶部数次以除去...

磁珠法提取DNA的实验步骤与注意事项有什么？

2023-10-11 磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠，这种磁珠微珠的表面标记了一种对核酸有吸附作用的特定活性官能团，能同核酸发生吸附反应，从而达到核酸与杂质分离的目的，进而获得纯化的核酸。那么磁珠法提取DNA的实验步骤与注意事项有什么呢？让我们一起来看看吧！一、步骤1、样本处理：核酸必须从细胞或其他生物物质中释放出来。（1）植物组织：液氮研磨或在特殊裂解液中电动匀浆；（2）动物组织：液氮研磨或裂解液中手动/电动匀浆；（3）血细胞：应用红细胞裂解液处理；（4）细胞：胰酶处理或蛋白酶K处理。2...

PCR纯化回收的步骤与注意事项有哪些？

2023-10-11 聚合酶链式反应产物中通?；岷泄康囊铩NTP、酶等，这些会对后续核酸序列测定、酶切、载体构建等产生影响，通过PCR纯化回收可获取纯的DNA扩增产物。那么PCR纯化回收的步骤与注意事项有哪些呢？让我们一起来看看吧！一、步骤1.在紫外投射仪或凝胶成像仪上，用刀片切取包含目的条带的琼脂糖凝胶并称重；2.一般以0.1g胶加入100μl溶胶液的比例（具体根据试剂盒说明添加），按凝胶实际重量加入溶胶液，水浴锅中55℃溶胶（期间可缓慢震动Ep管，将胶溶解wan全）；3.回收试剂盒中会...

Trizol法提取RNA的原理与步骤是什么？

2023-10-10 RNA是一种核酸分子，在生物学中扮演着重要的角色。在细胞内，RNA不仅具有转录和翻译的功能，而且在调控基因表达、细胞信号传导以及病理机制等方面也发挥着重要的作用。Trizol法是目前普遍使用的RNA提取方法，那么Trizol法提取RNA的原理与步骤是什么？让我们一起来看看吧！一、Trizol法的实验原理TRIZOL试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂，它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。试剂主要成分为异硫氰酸和苯酚，其中异硫氰酸肌可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使...

Trizol法提取RNA的注意事项与常见问题有哪些？

2023-10-10 Trizol法是目前普遍使用的RNA提取方法，那么Trizol法提取RNA有哪些注意事项和常见问题呢？让我们一起来看看吧！一、Trizol法提取RNA的注意事项在使用TRIZOL的时候要带手套和眼罩，避免接触到皮肤和衣服，使用化学通风橱，防止蒸汽吸入。从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800mlTRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μgRNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于...

常见的DNA纯化方法

2023-10-10 在分子生物学实验中，提纯DNA样本是十分常见的步骤，下面给大家介绍几种常见的DNA纯化方法，一起来看看吧！一、苯酚-氯仿抽提法苯酚和氯仿是常见的有机溶剂，一般可以用来将蛋白杂质从DNA样本里去除。基本原理是，有机溶剂会使杂质蛋白变性，并将杂质蛋白留在有机溶剂层，而DNA分子是有水溶性的，所以会进入水溶液层。这样DNA和杂质蛋白就被分开了。这个方法的好处是便宜有效，特别是在提取基因组DNA时，要去掉许多从细胞裂解液中带来的蛋白，苯酚法十分好用但苯酚和氯仿是有毒溶剂，而且有可能会...