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RNA提取的注意事项

2023-10-10 RNA是目前发现细胞内生物功能丰富多样的生物大分子，同时是DNA与蛋白质信息传递的桥梁，因此完整RNA的提取和纯化是功能基因组时代的重要手段。那么你知道RNA提取的注意事项都有哪些吗？让我们一起来看看吧！一、如何保存提取出的RNA？提取后溶解于RNase-freeWater中，RNA样品建议立即进行下游实验，如需储存，建议分装保存于-80℃。避免多次取用样品，反复冻融。二、为什么提取的RNA有降解？1.使用的组织材料不新鲜。提取RNA应采用新鲜的组织材料，或将新鲜组织材料用液...

RNA提取的原理

2023-10-10 RNA提取是分子生物学中的一个重要步骤。那么你知道RNA提取的原理是什么吗？让我们一起来看看吧！RNA提取是从细胞或组织中提取RNA的过程。RNA提取的目的是为了进一步分析RNA的组成、结构和功能，以便研究RNA在生物体内的作用和意义。RNA提取的基本原理是利用化学试剂将RNA从细胞或组织中分离出来，RNA的分离过程需要破坏细胞膜和核壁，使RNA从细胞中释放出来。此外，还需要去除DNA、蛋白质等杂质，使提取到的RNA纯度尽可能高。在普通PCR、QPCR、建库测序等实验，包括N...

你知道免疫组化实验的分类与应用吗？

2023-10-09 免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是基于抗原抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色来对组织内抗原进行定位、定性、定量的一项技术。那么你知道免疫组化实验的分类与应用吗？让我们一起来看看吧！一、分类根据抗体标记物的不同一般分为免疫酶标法、免疫荧光法、亲和组织化学法、免疫铁蛋白法、免疫金法、放射免疫自影法。下面介绍两种较为常用的两种技术：（1）免疫荧光法免疫荧光法是最早建立的免疫组织学技术。将已知抗体标上荧光素，以此作为探针，检查细胞或组织内的...

免疫组化实验流程有哪些？

2023-10-09 你知道免疫组化实验流程有哪些吗？让我们一起来看看吧！一、样品制备1.组织固定：根据要求收集人或动物的组织用于IHC分析，冲洗并用固定剂（一般用甲醛）进行固定2.组织包埋：将经甲醛固定的组织嵌入石蜡，以长期保持其天然形状和组织结构3.切片安装：将组织样品在切片机上切片，并转移至载玻片上干燥保持其形态4.脱蜡水化：因切片上的石蜡会妨碍染色，所以需将切片上的石蜡溶出，并水化。脱蜡或水化不全容易造成非特异性背景着色（一般的脱蜡水化步骤是：将切片依次浸入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10...

巨噬细胞的提取和分离方法是什么？

2023-10-09 巨噬细胞是机体免疫系统的重要细胞成分，具有抗感染、抗肿瘤和参与免疫应答、免疫调节等生物学功能。腹腔巨噬细胞多游离存在于腹水中易于获得。因此，可以通过向小鼠腹腔内注射刺激物制造无菌炎症环境以积聚巨噬细胞，来进行巨噬细胞研究。那么巨噬细胞的提取和分离方法是什么呢？让我们一起来看看吧！一、材料小鼠，SPF级，体质量18～22g，雄性，6～8周龄。二、肉汤制备1.6%淀粉肉汤制备将1.0g胰蛋白胨、0.3g牛肉浸膏和0.5g氯化钠放入盛有100mL双蒸水的烧杯中，置于磁力搅拌器常温溶...

免疫荧光实验流程有哪些？

2023-10-09 免疫荧光是一种常用的光学显微术，即用荧光显微镜来观察细胞中的特定生物分子。免疫荧光依赖于抗体抗原的特异性结合，然后通过直接标记或间接标记方法使用荧光分子指征抗体-抗原结合的位置，以确定目标生物分子在细胞中的位置、丰度和分布情况。那么你知道免疫荧光实验流程有哪些吗？让我们一起来看看吧！1.固定固定液种类：有机溶剂（甲醇、乙醇、丙酮等）；交联剂（4%PFA、10%中性福尔马林），固定液的选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的特性。但针对磷酸化的抗体，不适合用甲醛，会导致磷酸蛋白从...

如何区分细胞凋亡与坏死？

2023-10-09 细胞凋亡(Apoptosis)是生物界广泛存在的一种现象，与其它的生命现象一样具有同等重要的生理学或病理学意义。尽管其最终结果也是导致细胞死亡，但其诱导因素、发生机制和过程及意义均明显不同于一般的病理性细胞死亡。那么我们该如何区分细胞的凋亡与坏死呢？让我们一起来看看吧！细胞凋亡的形态特征与细胞坏死性死亡的形态特征不同。细胞坏死性死亡是被动的病理性死亡，其形态特征首先是膜通透性增加，细胞外型发生不规则变化，内质网扩张，核染色质不规则移位，进而线粒体及核肿张，溶酶体破坏，细胞膜破...

DNA转染有何注意事项？

2023-10-08 转染是生物学实验中常用的实验技术，那么你知道DNA转染有何注意事项吗？让我们一起来看看吧！一、质粒DNA转染注意事项1.启动子的选择启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响，但是对转染结果却有着微妙的影响。2.质粒的大小和质量线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟，相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好...